产品货号:
KD1896
中文名称:
血液RNA样品保存液
英文名称:
Blood RNA sample preservation solution
产品规格:
100mL|500mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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由于血液富含RNase,因此血液RNA(主要是白细胞RNA)非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。
本产品能快速渗透到新鲜抗凝血液中的有核细胞内(主要是白细胞),抑制RNA分子的降解。保存的血液白细胞RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
适用于人新鲜血和哺乳动物白细胞,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
操作说明:
一:白细胞的分离和保存
1、本产品保存全血的效果不好,故不建议用于全血的保存。必须先分离白细胞。
2、室温1500~2000g离心新鲜血液10~15分钟,最上层为血浆,最下层为红细胞,中间层为膜状的、含白细胞的Buffy Coat(含白细胞多的血液此层可能很厚)。
3、吸出血浆后,小心将中间的白细胞层吸出(允许污染少量红细胞),按0.5mL白细胞加入到2.5mL(5倍体积)的本产品的比例,将两者混合。
4、如此保存的白细胞可以在常温(不超过30℃)下放置3天,4℃可放置5天。如果需要-20℃放置,需要先在4℃放置1天,然后在13000g室温离心3分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,再将没有液体保存液的白细胞沉淀放置在-20℃,如此可放置3个月。不能直接将有液体保存液的白细胞悬浮液放置在-20℃,否则凝固形成的冰晶将会刺破白细胞膜,在凝固的冰晶融化时,白细胞胞浆成分(含RNA)会进入上清,在离心时丢失,离心得到的只是细胞残骸。
5、使用时,对4℃或以上温度保存的白细胞,将1.5mL本产品和白细胞的混合物转移到离心管中,13000g室温离心3分钟。小心吸出浅粉红色的上清液,沉淀为白细胞,直接用于RNA提取。如果是在-20℃保存的已经按上步方法处理的白细胞沉淀,则直接用于RNA提取。
二:RNA提取
1、建议使用Trizol或类似Trizol产品提取。
2、需要注意的是在加入异丙醇沉淀RNA时,本产品处理的样品由于盐离子浓度高会出现两层(即两相,正常样品会出现RNA沉淀,不会出现两层),小心去除上清,然后加入相当于下层体积2倍的50%的异丙醇,颠倒混匀后13000g室温离心10分钟,RNA将沉淀在管底。再按Trizol的标准操作流程用75%乙醇洗涤沉淀即可。
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